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1.组成成分不同斐林试剂和双缩脲试剂虽然都由NaOH和CuS04两种成分配制而成，但是用量上还是有所不同。斐林试剂分为甲液和乙液两种，其中甲液为0.1g/mL的NaOH溶液，乙液为0?05g/mL的CuS04溶液。双缩脲试剂分为A液和B液，其中A液为0.1g/mL的NaOH溶液，B液为0.01g/mL的CuS04溶液。2.使用方法不同斐林试剂是在甲、乙两液等量混合后立即使用，而使用双缩脲试剂时应先加入A液1mL，摇匀，再加入B液4滴，摇匀，再观察实验现象。
斐林试剂和双缩脲试剂都由NaOH溶液和CuSO4溶液组成，但二者有如下三点不同：
（1）溶液浓度不同
斐林试剂中NaOH溶液称为斐林试剂甲，其浓度为0.1g/ml,CuSO4溶液称为斐林试剂乙，其浓度为0.05g/ml；双缩脲试剂中NaOH溶液（双缩脲试剂A）的浓度为0.1g/ml，CuSO4溶液（双缩脲试剂B）的浓度为0.01g/ml。
（2）使用原理不同
斐林试剂是新配制的Cu(OH)2溶液，它在加热条件下与醛基反应，被还原成砖红色的Cu2O沉淀，可用于鉴定可溶性还原糖的存在。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）。
鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂，发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下的Cu2+与双缩脲试剂发生的紫色反应。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）结构相似的肽键，所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生颜色反应，可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在。
（3）使用方法不同
斐林试剂使用时，先将 NaOH溶液和CuSO4溶液混合（将4～5滴CuSO4溶液滴入2mlNaOH溶液中），而后立即使用：双缩脲试剂使用时，先加入NaOH溶液（2mL），振荡摇匀，造成碱性的反应环境，然后再加入3~4滴CuSO4溶液，振荡摇匀后观察现象。
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